背景设定在新奥尔良，女刺客主角的名字叫艾夫琳。时间设定与《刺客信条 3》相同，聚焦 1765 年至 1780 年的法国与印第安战争。艾夫琳的导师名叫埃格特，他是新奥尔良刺客组织的领导者。艾夫琳拥有半法国，半非洲黑人血统。她还将在本作里碰到《刺客信条 3》的主角康纳。

与《刺客信条 3》一样，游戏里的“边境”场景会有众多野生生物，例如“短吻鳄”，它们会在沼泽的浅滩或隐藏在水里等待。新的武器包括，甘蔗砍刀，滑膛枪等。